El museo está situado en los Palacios de los Maestres de Calatrava, un palacete construido en el siglo XVIII sobre uno anterior del siglo XV, y sustituye a su anterior sede en una bocacalle de la Plaza Mayor, que resultaba insuficiente para la exhibición de los fondos disponibles.

El nuevo Museo Nacional de Teatro guarda un valioso material de teatro, ópera, música, anza, zarzuela y revista que le convierten en lugar de referencia para estudiosos y amantes del teatro español y acrecienta el protagonismo de Almagro como capital de las artes escénicas en España.